Contexte:
Monsieur Génibio chercheur au CNRS décide d'étudier un gène de résistance et de chercher
son emplacement génétique : est-il placé sur un plasmide ou fait-il parti du génome de E. coli?
Pour cela il cherche sur le site du NCBI, les différents plasmides connus d'E. coli. Puis il
cherche des fragments à amplifier de même taille du gène de résistance en utilisant des
amorces différentes afin qu'elles ne puissent amplifier que 2 plasmides différents. Il cultive la
bactérie pathogène, lyse les cellules, extrait l'ADN plasmidique, et réalise différentes PCR avec
ces différents jeux d'amorces. Enfin il analyse ces résultats par une électrophorèse.
Question 2: Justifier le terme « lyse alcaline » employé pour qualifier la méthode d'extraction d'ADN
plasmidique.
Question 3: expliquer comment est purifié l'ADN plasmidique.
Question 4: Rappeler le but et le principe de la PCR à l'aide du document 3
Question 5 : Indiquer quel est le rôle du témoin négatif PCR.
Question 6 : Sur le document 5 (séquence ADN) la zone amplifier par PCR est surlignée. Monsieur
Génibio a décidé d'utiliser des amorces de 18 nucléotides. Indiquer les amorces à prévoir pour
réaliser la PCR du fragment du vecteur donné.
Question 7: Rappeler le but et le principe de l'électrophorèse.
Question 8 :Réaliser l'organigramme de la réalisation de l'électrophorèse (document 6).
Question 9: Rappeler comment est chargé l'ADN et indiquer vers quel pôle il va migrer.
Question 10 : Analyser le gel d'électrophorèse, à l'aide des documents 4 et 6.
Question 11: Conclure sur le plasmide présent chez la bactérie étudiée.